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Service de CRYOpréservation/redérivation

Le service CRYOpréservation/redérivation du réseau des animaleries montpelliéraines (RAM), a pour principales missions la cryopréservation, la revitalisation, et la redérivation des lignées de souris génétiquement modifiées. Ouvert en octobre 2013, le service propose des prestations de service dans le domaine de la cryopréservation de lignées sous forme de sperme ou d’embryons et assure l’archivage et le stockage à long terme de ces paillettes sur 2 sites distincts pour plus de sécurité. La cryopréservation apporte une solution d’intérêt pour la sécurisation des projets de recherche mais également pour la rationalisation des lignées qui ne sont plus utilisées activement. Elle permet de réduire très significativement les coûts de maintien d’une lignée moins utilisée. Le service du RAM assure la congélation de vos lignées selon des protocoles standardisés en intégrant des contrôles qualités adéquats réalisés par fécondation in vitro (FIV). La FIV constitue par ailleurs une méthode de choix pour la redérivation et l’import de lignées ne présentant pas le statut sanitaire adéquat. L’échange de lignées entre chercheurs et l’importation de nouvelles lignées dans le réseau RAM peut également se faire par le biais de ces paillettes congelées. La lignée pourra être revitalisée à la demande des utilisateurs par FIV ou transfert d’embryons. Le service CRYO du RAM propose également de gérer les exports de ces lignées vers des collaborateurs éventuels. Enfin, dans le cadre de ses missions visant à favoriser les collaborations entre équipes de recherche académiques, le service CRYO du RAM centralise les informations associées aux lignées cryopréservées. Un fichier centralisant les informations associées aux lignées Cre et aux lignées rapporteurs (GFP, b-Gal, etc...) qui ont été congelées sera diffusé au sein du réseau RAM, dans le respect de la confidentialité associée aux projets de recherches, des utilisateurs de ces lignées, et des règles administratives régulant leur utilisation (MTAs).
Tableau cre (en attente)

Equipements/personnel

Laboratoire de Cryopréservation :
1 personne responsable du service
1 Stéréomicroscope Zeiss (Stemi 2000),
1 hotte PSM
1 incubateur
1 bain-marie
1 réfrigérateur/congélateur
1 plaque chauffante

1 congélateur progressif à embryon : le freezal
2 containers à azote liquide sur 2 sites

Laboratoire de réimplantation (commun au service Transgénèse) :
1 stéréomicroscope
1 plaque chauffante pour petit animal (chambre de réveil)
1 Hotte PSM (à prévoir)

Expertise – Prestations (Nature et description)
- Cryopréservation des lignées par congélation de sperme
La prestation de congélation de sperme est proposée pour la plupart des fonds génétiques. Le cryoprotecteur utilisé est le CPA-MTG.
Sur chacun des sites, une personne référente est désignée à la congélation de lignée de souris génétiquement modifiée. Toutefois la préparation du milieu de congélation (CPA-MTG) est réalisée par le service pour l’ensemble des sites du RAM ainsi que la validation de ce dernier avant utilisation sur les différents sites.

Formulaire + Fiche descriptive de la lignée à renvoyer au service

Word - 99 ko
Formulaire de description de la lignée
Word - 383 ko
Formulaire de demande de congélation de sperme

- Revitalisation à partir de paillettes congelées / Redérivation par transferts d’embryons issus de FIV
Formulaire + Fiche descriptive de la lignée à renvoyer au service

Word - 99 ko
Formulaire de description de la lignée
Word - 102 ko
Formulaire de revitalisation

- Stockage des lignées congelées hors site sous forme de sperme et/ou d’embryons à long terme dans 2 cryocontainers distincts
Formulaire + Fiche descriptive de la lignée à renvoyer au service

Word - 99 ko
Formulaire de description de la lignée
Word - 391 ko
Formulaire de demande stockage de paillette hors site

- Export/Import de paillettes de sperme et/ou d’embryons
Formulaire

Word - 91.5 ko
Formulaire de demande d’envoi de paillettes de sperme embryon

- Cryopréservation des lignées par congélation d’embryons (futur proche)
Les embryons sont obtenus selon deux méthodes : (i) In vivo (embryons au stade 2 cellules sont récupérés par flushing des oviductes suite à un accouplement contrôlé), (ii) par fécondation in vitro (FIV) (embryons au stade 2 cellules à partir de sperme congelé)

Contact : cryopreservationRAM@biocampus.cnrs.fr

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